Основни услови за културу ћелије
1. Одговарајући медијум за ћелијску културу
Погодан медијум за ћелијску културу је један од најважнијих услова за раст и пролиферацију ћелија ин витро. Медијум за културу не само да обезбеђује исхрану ћелија и основне супстанце за промовисање раста и пролиферације ћелија, већ такође обезбеђује животну средину за раст и репродукцију култивисаних ћелија.
2. Висококвалитетни серум
Тренутно, већина синтетичких медија захтева додавање серума. Серум је једна од најважнијих компоненти у медијуму ћелијске културе, која садржи низ фактора раста и друге хранљиве материје потребне за раст ћелија.
3. Константна температура раста ћелија
Да би се одржао снажан раст култивисаних ћелија, мора постојати стална и одговарајућа температура.
4. Погодно окружење за гас
Гас је један од неопходних услова за опстанак ћелија сисара, а потребни гасови су углавном кисеоник и угљен-диоксид.
5. Температура ћелијске културе
Да би се одржао снажан раст култивисаних ћелија, мора постојати стална и одговарајућа температура. Различити типови ћелија имају различите захтеве за температуру културе. Стандардна температура за културу људских ћелија је 36,5 степени ± 0.5 степени. Одступање од овог температурног опсега ће утицати на нормалан метаболизам ћелија, па чак и умријети.
6. Погодно окружење за гас
Гас је један од неопходних услова за опстанак културе ћелија сисара, а потребни гасови су углавном кисеоник и угљен-диоксид. Кисеоник учествује у циклусу трикарбоксилне киселине, производећи енергију за раст и пролиферацију ћелија и синтетизујући различите компоненте потребне за раст ћелија.
Уобичајена контаминација ћелијске културе
1. Бактеријска контаминација
Бактеријска контаминација је најчешћа. Једном када операција буде мало неправилна, то ће изазвати контаминацију ћелија. Након бактеријске контаминације, изгледаће као црне танке траке песка када се посматра под микроскопом. У облику штапа итд. Друго, подлога за културу постаје жута и замућена, а у петријевој посуди се јасно виде фини седименти у облику песка, а с времена на време постоји чудан мирис.
2. Гљивична контаминација
Раствор културе контаминиран гљивама је бистар и провидан, не налик великом избијању бактеријске инфекције, па га је тешко рано открити. Понекад изгледа као филамент под микроскопом, понекад као корал, а полако ће расти врло танка црна нит. Ово Када је прекасно, ћелије се тешко могу спасити.
3. Контаминација плесни
У складу са гљивичним инфекцијама, пошто је подлога за културу бистра, гљивичну контаминацију је тешко открити рано, када је често прекасно. Флокулантне нечистоће су се полако појављивале у медијуму за културу, а под микроскопом су се могли видети филаментозни масени плутајући објекти, попут мачака на ветру. Ћелије и даље могу расти, али временом се ћелије погоршавају и престају да расту.
4. Инфекција микоплазмама
Подлога за културу постаје мутна. Након што микоплазма инфицира ћелије, цитопатске промене нису очигледне, али се стање ћелије погоршава и раст успорава. Под микроскопом могу бити мале црне тачке, али медијум за културу углавном није замућен. Након што су ћелије биле пасиране, појавиле су се међућелијске црне мрље, ћелије су биле вакуолисане, а многе ћелије су личиле на апоптозу и некрозу. На крају, ћелије су плутале и потпуно умрле.
Превенција контаминације ћелија
Успостављање добрих правила и прописа може значајно допринети смањењу контаминације ћелија. Укључујући приступни систем, оперативне норме и систем дневног управљања.
Систем приступа: укључујући особље и материјале. Особље треба да буде обучено пре него што може самостално да ради и мора да испуни услове за ношење пре уласка у лабораторију, као што су бели мантили, изолационе хаљине, маске, рукавице, итд. стерилисане и стерилисане, а купљене артикле је потребно куповати преко редовних и поузданих канала. Новокупљене ћелије треба тестирати и верификовати пре употребе.
Оперативне спецификације: Најбоље је формулисати спецификације за рутинске операције, а лабораторијско особље мора пратити радне спецификације, које се не могу мењати по вољи, као и да негује добре радне навике за лабораторијско особље. На пример, након што се врх пипете увуче, он се неће продужити у медијум по други пут, а довољна количина медијума ће се једном усисати. Приликом додавања течности, течност треба додати у суспензији што је више могуће, што може ефикасно спречити контаминацију микоплазмом и унакрсну контаминацију ћелија. Поред тога, ако је могуће, користите само једну по једну ћелијску линију и боље је имати мали временски интервал између ћелија да бисте избегли унакрсну контаминацију.
Систем дневног управљања: укључује правила и методе за коришћење, чишћење и одржавање животне средине и потрошног материјала, реагенса итд. узорци ћелија. За изворе контаминације које није лако пронаћи, најбоље је спроводити редовно тестирање, углавном контаминацију микоплазмом и унакрсну контаминацију ћелија.
БКМАМ Био обезбеђује одговарајући потрошни материјал за ћелијску културу:
Пластичне округле/квадратне петријеве посуде за једнократну употребу:
Високо прозирни полистиренски материјал (ПС);
Површина је глатка и равна, и нема оптичког изобличења ћелија под микроскопом;
Дизајн слагања олакшава слагање и складиштење;
Стерилизација етилен оксидом (ЕО);
Отпорност на хабање и корозију.
Адхерентни третман посуда за ћелијску културу:
Полистиренски материјал (ПС);
Стерилизација електронским снопом, без пирогена, без токсина;
Обрада површине вакуумом плазмом, одлична адхезија ћелија;
Површина је глатка и равна, и нема оптичког изобличења ћелија под микроскопом;
Дизајн који се може сложити олакшава слагање и складиштење.
Пластичне плоче за културу ћелија:
Полистиренски материјал (ПС);
Погодно за нормалну ћелијску културу, нелепљиве плоче за третман;
Без пирогена, без токсина, стерилисано;
Независно паковање типа лако кидање, лако за руковање;
Адхерентни третман плоча са ћелијском културом:
Полистиренски материјал (ПС);
Тип плоче за адхерентни третман (ТЦ третман), погодан за културу адхерентних ћелија;
Без пирогена, без токсина, стерилисано;
Независно паковање типа лако кидање, лако за руковање;
Све су равног дна.
Адхезивни третман боца ћелијске културе:
Полистиренски материјал (ПС);
Стерилизација електронским снопом, без пирогена, без токсина;
Обрада површине вакуумом плазмом, одлична адхезија ћелија;
Прозрачни покривач, који погодује размени гасова и спречава пролаз микроорганизама.
Унутрашње/спољашње спин криоовиале:
100% чист полипропиленски материјал (ПП);
Може издржати стерилизацију од 15 пси, 121 степен;
Зид цеви је задебљан, а тело цеви има скалу и област за писање;
Постоји силиконска прстенаста заптивка између навоја поклопца цеви и тела цеви да би се обезбедила непропусност;
Без ДНазе, без РНазе, без пирогена, без ендотоксина.
